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2×常规PCR预混液(含染料)
MP001L
2 x routine PCR premix (with dye)
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MP001L-100×1mL 100×1mL ¥2200.00

2×Taq Mix (+Dye)  

REF: MP001

 

储运条件

 

长期保存请于-20保存,避免反复冻融。 

产品组成

组分/规格

MP001S

MP001M

MP001L

2×Taq Mix (+Dye)

5×1 ml

4×5×1 ml

100×1 ml

 

产品简介

2×Taq Mix (+Dye) 的浓度为,使用方便快捷,能减少 PCR 操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Taq Mix (+Dye),加入模板和引物,并加入ddH2O补足体积,使反应体系浓度为 即可进行 PCR 反应。

Mix最长可扩增5 kb DNA片段,具有良好的扩增特异性和模板兼容性,PCR产物3' 端带A碱基,纯化后可直接用于T/A克隆。PCR Mix中包含两种染料,PCR产物无需添加Loading Buffer可直接点样电泳,且电泳过程中会出现两个指示条带。该染料不影响PCR扩增效率,但对于需要对PCR产物进行吸光度、荧光等光学分析的实验,建议在分析前对PCR产物进行纯化,或使用无染料的2×Taq Mix

 

质量控制

 

 

核酸外切酶残留检测

 

将酶液与双链DNA底物在37温育16h,通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

核酸内切酶残留检测

将酶液与超螺旋质粒DNA37℃温育4h,通过DNA电泳检测质粒无变化

稳定性测试

室温存放一周,无明显活性改变。

功能检测

分别以质粒DNA、人基因组DNA和酵母菌液为模板扩增1~5 kb 3个片段, 30个循环后将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,经核酸染料染色,可见目的条带。

 

 

 

 

使用方法

1. 常规PCR反应体系

试剂

使用量

终浓度

 2×Taq Mix (+Dye)

25 μl

正向引物(10 μM)a

1~2 μl

0.2~0.4 μM

反向引物(10 μM)a

1~2 μl

0.2~0.4 μM

DNA 模板b

X μl

 

ddH2O

To 50 μl

 

a.引物推荐终浓度为0.2~0.4 μM,效果不佳时可以在0.1~1 μM浓度范围内进行调整;

b.不同模板最佳反应浓度有所不同,以50 μl体系为例:模板为基因组DNA时,一般推荐的使用量为10~400 ng;当模板为质粒或病毒DNA时,一般推荐的使用量为10 pg~20 ng

 

2. 常规PCR反应程序

步骤

温度

时间

预变性a

94

3~5 min

变性

94

30 sec

退火

55~65

30 sec             30-35 Cycles

延伸 b

72

30~60 sec/kb

终延伸

72

5 min

 

a. 该预变性条件适合绝大多数扩增反应,对于一些复杂模板,例如:菌液、菌落(尤其是酵母)的PCR扩增,预变性时间可延长至10 min,以提高预变性效果;

 

b. 关于延伸速率,当目的片段长度不超过2 kb时,推荐使用30 sec/kb;当目的片段长度大于2 kb时,推荐使用60 sec/kb

 

注:使用酵母菌液作为PCR扩增模板时,建议扩增的目的片段长度不超过2.5 kb,若超出2.5 kb,酵母菌液需要预先进行破壁处理。

 

3.凝胶浓度对应的染料迁移距离

琼脂糖凝胶浓度

金色条带

蓝色条带

0.8%

~80 bp

4000 bp

1.0%

~40 bp

2000 bp

1.5%

~20 bp

1500 bp

2.0%

 

1200 bp

2.5%

 

1200 bp

3.0%

 

1200 bp

注:染料会影响吸光

 

象形图
警示语
Class
警告声明
UNub
危险声明
Packing Group
MP001 2X Taq mix (+Dye)说明书_00_1.png 下载

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