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生化检测试剂盒

双缩脲法蛋白含量测定试剂盒（微量法100T/96S）

产品编号： PDM002

英文名： Biuret Method Protein Content Assay Kit (Microassay)

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PDM002-100T/96S	100T/96S	¥120.00

双缩脲法蛋白质含量检测试剂盒说明书

微量法100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定，以确保蛋白浓度在0.5-10mg/mL范围内

测定意义：

双缩脲蛋白含量检测法是用于比色检测和总蛋白质定量的常用方法，具有操作简便、重复性好、试剂稳定等特点。

测定原理：

蛋白质能够在强碱性溶液中与双缩脲试剂形成紫色络合物，产物在 540 nm 处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测蛋白的含量。

试剂组成和配制：

标准品：5mg/mL的BSA标准液。

注：提取液需自备(根据试验要求可选用蒸馏水、生理盐水或不含蛋白的PBS)，应不含硫酸铵、Tris 缓冲液，否则改用BCA法蛋白含量检测试剂盒(PDM005、PDM006)测定)

需自备仪器和用品：

酶标仪、电子天平、台式离心机、研钵、可调式移液器、96孔板、蒸馏水。

可溶性蛋白提取：

1. 组织：按照组织质量(g) : 提取液体积(mL)为1：5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加1mL提取液)进行冰浴匀浆，8000g，4℃，离心10min后取上清置于冰上待测。

2. 细菌和细胞：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体样本：澄清无色液体样品可以直接或使用提取液适当稀释后再进行测定，悬浊液则需8000g，4℃，离心10min取上清测定。

测定步骤：

酶标仪预热30min以上，

试剂名称(µL)	测定管	标准管	空白管
样本	40
标准品		40
蒸馏水			40
试剂一	200	200	200
充分混匀，室温静置15min，取200μL于96孔板中，测定540nm处吸光值，记为A测定、A标准、A空白。ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。注：标准管和空白管仅需测定1-2次。

蛋白含量计算公式：

1.按组织样本质量计算：

蛋白质含量(mg/g 鲜重)=C标准×(ΔA测定÷ΔA标准)×V样总÷W×D =5×(ΔA测定÷ΔA标准)÷W×D

2.按细菌/细胞数量计算：

蛋白质含量(mg/10⁴ cell)=C标准×(ΔA测定÷ΔA标准)×V样总÷500×D =5×(ΔA测定÷ΔA标准)÷500×D

3.按液体样本体积计算

蛋白质含量(mg/mL)=C标准×(ΔA测定÷ΔA标准)×D =5×(ΔA测定÷ΔA标准)×D

C 标准：BSA标准品浓度，5mg/mL；V样总：提取液总体积，1mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，以万计；D：稀释倍数。

注意事项：

待测样本蛋白浓度须在0.5-10 mg/mL范围内，低于0.5 mg/mL或吸光值小于0.08则不能使用此法测定，高于10mg/mL或吸光值大于0.29应适当稀释后再进行测定，计算时相应修改。

实验实例：

称取0.11g新鲜牛肝，加入1mL 0.9%生理盐水研磨匀浆，取上清，稀释2倍，按测定步骤操作，ΔA测定=0.194-0.074=0.12，ΔA标准=0.182-0.074=0.108，蛋白质含量（mg/g）=101.01mg/g。

常见问题及解决方案：

问题	可能原因	解决方法
样品读数重复性差	样品类型不合适	参考说明书了解不兼容的样品类型
	组织样品匀浆不充分	延长超声时间/增加匀浆器的研磨次数
	样品反复冻融次数过多	将样品分装，不可反复冻融
	样品中含有干扰物质	排查干扰物质
	样品读数超出线性范围	对样品进行浓缩或稀释，使读数处于线性范围内
	孔中有气泡	气泡会干扰读数，操作时尽量避免产生气泡，读数前务必去除气泡
样品和标准品读数偏低/偏高	样品放置时间过长或储存不当	使用新鲜制备的样品，按推荐温度保存至使用前
	试剂加样量错误	检查移液枪是否校准(始终使用能吸取整体积的最小量程移液枪)；尽量避免吸取过小体积的试剂
	配制反应混合液时移液误差	始终配制混合母液

PDM002双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒说明书（微量法100T96S）V2.1.pdf

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