土壤木质素过氧化物酶(Soil lignin peroxidase,S-Lip)试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理:
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310nm处有特征吸收峰。
试剂组成和配制:
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产品名称
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SSQ067-100T/48S
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Storage
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试剂一:液体
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25ml
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4℃
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试剂二:液体
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15ml
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4℃避光
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试剂三:液体
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10ml
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4℃
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定步骤:
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对照管
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测定管
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土样(g)
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0.04
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0.04
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甲苯(μl)
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30
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30
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25℃静置15min
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试剂一(μl)
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200
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蒸馏水(μl)
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200
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试剂二(μl)
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120
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120
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试剂三(μl)
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80
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80
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30℃震荡反应3h,冰浴5min,12000g,4℃离心10min,取上清200μl,于微量石英比色皿/96孔板(UV)板,测定310nm处吸光值,分别记为A对照和A测定,△A=A测定- A对照
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酶活计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=
×V反总÷W÷T= 344×△A÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.4ml; W:样本质量,g;T:反应时间,3h
b. 用96孔板测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=
×V反总÷W÷T= 688×△A÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.4ml; W:样本质量,g;T:反应时间,3h。