土壤锰过氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)试剂盒说明书
微量法100T/48S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理:
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
试剂组成和配制 :
|
产品名称
|
SSQ065-100T/48S
|
Storage
|
|
试剂一:液体
|
12ml
|
4℃
|
|
试剂二:液体
|
2ml
|
4℃
|
|
试剂三:液体
|
4ml
|
4℃避光
|
|
试剂四:液体
|
2ml
|
4℃
|
|
说明书
|
一份
|
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪、甲苯。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定步骤:
|
|
对照管
|
测定管
|
|
土样(mg)
|
40
|
40
|
|
甲苯(μl)
|
30
|
30
|
|
25℃,静置15min
|
|
试剂一(μl)
|
140
|
120
|
|
试剂二(μl)
|
|
20
|
|
试剂三(μl)
|
40
|
40
|
|
试剂四(μl)
|
20
|
20
|
|
充分混匀,于30℃震荡反应3h,于10000rpm,4℃离心10min,取150μl于微量石英比色皿/96孔板,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管
|
酶活计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP活性(nmol/d /g 土样)=
×V反总÷W÷T= 66.4×△A÷W
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2ml;W:样本质量,g;T:反应时间,3h
b. 用96孔板测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP活性(nmol/d /g土样)=
×V反总÷W÷T= 132.8×△A÷W
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2ml;W:样本质量,g;T:反应时间,3h