土壤锰过氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理:
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
试剂组成和配制:
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产品名称
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SSQ064-50T/24S
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Storage
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试剂一:液体
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30ml
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4℃
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试剂二:液体
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5ml
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4℃
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试剂三:液体
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10ml
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4℃避光
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试剂四:液体
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5ml
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4℃
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说明书
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一份
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自备仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿、震荡仪、甲苯。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作:
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对照管
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测定管
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土样(g)
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0.1
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0.1
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甲苯(μl)
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50
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50
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25℃,静置15min
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试剂一(μl)
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700
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600
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试剂二(μl)
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100
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试剂三(μl)
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200
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200
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试剂四(μl)
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100
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100
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充分混匀,于30℃震荡反应3h,于10000rpm,4℃离心10min,取800μl于1ml玻璃比色皿,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管
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酶活计算公式:
(酶活性定义:每克土壤每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP活性(nmol/min/g 土样)=
×V反总÷W÷T= 8.3×△A÷W
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1ml;W:样本质量,g;T:反应时间,10min