土壤几丁质酶(Soil Chitinase,S-Chitinase)试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
试剂组成和配制:
|
产品名称
|
SSQ062-50T/24S
|
Storage
|
|
试剂一:液体
|
10ml
|
4℃
|
|
试剂二:液体
|
4ml
|
4℃
|
|
试剂三:液体
|
50ml
|
4℃避光
|
|
说明书
|
一份
|
自备仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 ml玻璃比色皿,甲苯、蒸馏水。
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作表:
|
|
对照管
|
测定管
|
|
土样(g)
|
0.2
|
0.2
|
|
甲苯(μl)
|
30
|
30
|
|
混匀,25℃静置15min
|
|
蒸馏水(μl)
|
200
|
|
|
试剂一(μl)
|
|
200
|
|
混匀,37℃培养24h
|
|
蒸馏水(μl)
|
400
|
400
|
|
4000rpm,4℃,离心10min,取上清300μl于新的EP管中
|
|
试剂二(μl)
|
30
|
30
|
|
混匀,沸水浴5min
|
|
试剂三(μl)
|
900
|
900
|
|
混匀,37℃显色20min,取1ml于1ml玻璃比色皿中,蒸馏水调零,测定585nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,ΔA=A测定管-A对照管。
|
计算公式:
标准曲线:y=5.2714x-0.0007,R2=0.9989;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值ΔA。
酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性(μg/d/g 土样)=(ΔA +0.0007)÷5.2714×V反总÷W÷T×1000= 598×(ΔA +0.0007)
V反总:反应体系总体积,0.63ml;W:样本质量,0.2g;T:反应时间,1d;1000:1mg/ml=1000μg/ml
注意事项:
试剂一充分混匀后再使用。