土壤碱性蛋白酶(Solid - Alcalase Protease,S-ALPT)试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ALPT在碱性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理:
碱性条件下,S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。
试剂组成和配置:
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产品名称
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SSQ019-50T/24S
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Storage
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试剂一:液体
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20ml
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4℃
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试剂二:粉剂
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1瓶
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4℃
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试剂三:粉剂
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1瓶
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4℃
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试剂四:粉剂
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1瓶
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4℃
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试剂五:液体
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10ml
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4℃
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试剂六:液体
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1.5ml
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4℃
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试剂七:液体
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5ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入6ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入2ml试剂七,沸水浴加热溶解,然后加入8ml;
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入40ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂六:液体1.5ml×1支,0.05mg/ml标准酪氨酸溶液;4℃保存。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定。
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试剂名称
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测定管
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对照管
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风干土样(g)
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0.04
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0.04
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试剂一(μl)
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300
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试剂三(μl)
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300
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混匀后,40℃水浴30min,振荡5-6次,使土样与反应液充分接触
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试剂二(μl)
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100
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100
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混匀,8000g 25℃离心10min,取上清液,在EP管中加入下列试剂
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测定管
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对照管
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标准管
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上清液(μl)
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150
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150
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试剂六(μl)
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150
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试剂四(μl)
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700
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700
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700
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试剂五(μl)
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150
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150
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150
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混匀,40℃水浴20min,8000g 25℃离心10min,取上清液,680nm下读取各管吸光值A
注意事项
标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ALPT活性计算:
单位定义:每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-ALPT活力单位。
S-ALPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管-A对照管)÷A标准管
C标准管:标准管浓度,0.05mg/ml;V反总:反应体系总体积,0.4ml;T:反应时间,30min=1/48d; W:样本质量,0.04g。