土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
测定原理:
采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
试剂的组成和配制:
|
产品名称
|
SSQ009-50T/24S
|
Storage
|
|
试剂一:甲苯
|
10ml(自备)
|
4℃
|
|
试剂二:液体
|
6ml
|
4℃
|
|
试剂三:液体
|
40ml
|
4℃
|
|
试剂四:粉剂
|
1瓶
|
4℃
|
|
说明书
|
一份
|
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存; 临用前加入5ml蒸馏水和45ml浓硫酸充分溶解待用。
需自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
加样表和测定步骤:
|
|
对照管
|
测定管
|
|
风干土样(g)
|
0.1
|
0.1
|
|
试剂一 (μl)
|
100
|
100
|
|
振荡混匀15min
|
|
试剂二(μl )
|
|
180
|
|
试剂三(μl )
|
740
|
740
|
|
蒸馏水(μl )
|
360
|
180
|
37℃振荡反应3h后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后
8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液;
|
糖化液 (μl)
|
350
|
350
|
|
试剂四 (μl)
|
650
|
650
|
混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,620nm处蒸馏水调零,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-CL活力计算:
标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T:反应时间,3h=1/8d; V反总:反应体系总体积:1.2ml;W:样本质量,0.1g。